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| CULTIVOS INTENSIVOS / Micropropagación |
Normas prácticas de trabajo e higiene para laboratorios de micropropagación de especies vegetales que se practican en Bioext.
Todo laboratorio de Micropropagación debe constar con diferentes áreas de trabajo que aseguren condiciones de asepsia y esterilidad dependiendo de las tareas que se realicen. En la sala específica de micropropagación, se debe contar con un flujo laminar de tipo horizontal con un filtro HEPA de al menos 0.22 uM de tamaño de poro. El espacio destinado a tal fin debería poseer pisos, paredes y techos realizado con materiales de fácil limpieza.
Con el fin de evitar flujos de aire turbulento que perjudiquen el buen funcionamiento de los flujos laminares e incrementen la contaminación por agentes externos se deben crear salas de doble entrada (pre-cámaras) tanto en la/s salas donde se encuentran ubicados dichos equipos, como así también en las cámaras de plantas. Dichas salas deberán contar con presión positiva mediante la entrega de aire estéril forzado.
El laboratorio de micropropagación debe contar además con salas de:
- Desinfección de plantas
- Esterilización de material
- Sala de lavado de material (potes, pinzas, botellones, etc.)
- Sala de ingreso general
En la pre-cámara de ingreso al laboratorio (sala de ingreso general): los operarios dejan prendas portadoras de ácaros como por ejemplo bufandas, ropa de lana en general y se procede a la colocación de cubre calzado.
Una vez dentro del laboratorio se coloca el guardapolvo, botas, barbijos y guantes de látex (estas prendas son indispensables para movilizarse dentro de las instalaciones).
Pre-cámara de ingreso a la cámara de cultivo: en dicho sector los operarios trabajan con guardapolvos, botas, barbijos y guantes de látex, en esta zona se tienen que evitar los movimientos bruscos para no generar flujo turbulentos de aire y eliminar la menor cantidad de partículas por parte del operador.
Sala de desinfección y lavado: en estas áreas es indispensable la utilización de material (vestimenta y equipamiento) que no se utilice en la sala de micropropagación con el fin de evitar contaminaciones cruzadas.
Equipamiento básico del laboratorio de micropropagación:
- Flujo laminar horizontal
- Autoclave
- Material de vidrio (pipetas, frascos, erlenmeyers, etc)
- Material descartable
- Phmetro
- Agitadores
- Heladera
- Freezer – 18 o – 70.
- Micropipetas
- Destilador (optativo)
- Sistema de suministro de agua, gas y de ser posible vacío (optativo).
- El laboratorio requiere el uso de un sistema de aire acondicionado filtrado (tipo quirófano), con filtros de entrada y salida de aire.
ETAPAS
1) Estabilización (explanto) puede provenir de:
- Yemas: axilares o apicales
- Disco de hoja
- Trozos de pecíolo
- Células aisladas
2) Multiplicación
Dependiendo del material de partida, se selecciona el medio de cultivo para la multiplicación que se va a utilizar, MS, WPM, KNOPS, ANDERSON, ZIMMERMAN, etc. La preparación del medio de cultivo se realiza utilizando agua destilada y/o desionizada, dicho medio posee los macro y micro nutrientes, vitaminas y pH aptos para el crecimiento de la variedad elegida.
3) Formacion de raiz
La formación de la misma se induce con la utilización de cantidades reguladas de Auxinas y Citoquinina |
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